9. MORFOLOGIA DE COLÔNIAS DE MICRO-ORGANISMOS

Fonte: https://focusfoto.com.br/

IDENTIFICANDO BACTÉRIAS E Candida spp. 

                            (Microbiologia Básica e Clínica  / Profa . Zilka Nanes Lima)

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A. Primeiro passo: Isolar o micro-organismo em meio de cultura sólido e fazer a análise morfológica da colônia.
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Análise morfológica da colônia (Utilizar os espaços que seguem para anotar a interpretação destas características e ao final sugerir o possível gênero e/ou espécie do micro-organismo).

Meio de cultura: _______________________  Densidade: _________________________

Tamanho/Odor: _______________________   Cor: _______________________________

Borda ou forma:_______________________  Consistência/Aparência: _______________

Elevação:____________________________   Hemólise em ágar Sangue: _____________

Sugerir qual é o micro-organismo: _____________________________________________

Figura 1 - Cultura em ágar Sangue, meio sólido não seletivo, de Streptococcus pyogenes (beta-hemolítico),
 incubado à 36ºC em microaerofilia por 24 horas em estufa bacteriológica.

Fonte: Autora (arquivo pessoal)

Figura 2 - Cultura em ágar Sangue, meio sólido não seletivo, de Streptococcus mutans (alfa-hemolítico),

 incubado à 36ºC em microaerofilia por 24 horas em estufa bacteriológica.

Fonte: Autora (arquivo pessoal)

Figura 3 - Culturas em ágar Manitol Salgado, meio sólido seletivo, de Staphylococcus aures manitol positivo (à esquerda) e Staphylococcus epidermidis manitol negativo (à direita), incubado à 36ºC por 24 horas.

Fonte: Autora (arquivo pessoal)

              Tabela 1 - Características do crescimento de alguns micro-organismos.

Micro-organismo	Tamanho / Odor	Borda ou forma	Elevação	Densidade	Cor	Consistência/ Aparência	Hemólise em AS
Staphylococcus aureus	Grande /Queijo	Circular	Convexa	Opaca	Amarela ou branca	Cremosa	Em geral beta
Staphylococcus coagulase-negativa	Médio /Queijo	Circular	Elevada	Opaca	Branco-acizentada	Cremosa	Em geral sem
Streptococcus do grupo viridans	Pequeno /Caramelo	Irregular, puntiforme	Achatada	Opaca	Branco-acizentada	Embaçada	Alfa
Streptococcus pneumoniae	Pequeno	Circular	Umbilicada Achatada	Transparente	Cinza	Brilhante Mucóide	Alfa
Streptococcus pyogenes	Pequeno	Puntiforme	Convexa	Translúcida	Cinza	Brilhante	Beta
Streptococcus agalactiae	Médio	Circular	Convexa	Translúcida	Cinza	Cremosa	Beta
Enterococcus faecalis	Médio /Caramelo	Circular	Elevada	Opaca	Cinza	Brilhante	Em geral sem
Enterobacter spp.	Médio /Fermento de pão	Circular	Convexa	Opaca	Cinza(AS) Rosa(MC)	Levemente mucóide	Sem hemólise
Escherichia coli	Médio /Vinagre	Circular	Achatada	Opaca	Cinza (AS) Rosa(MC)	Seca Brilho verde metálico (EMB)	Em geral beta
Klebsiella spp.	Grande /Fermento de pão	Circular	Convexa	Opaca	Cinza(AS) Rosa(MC)	Mucóide	Sem hemólise
Morganella morganii	Médio /Fétido	Ondulada	Achatada	Translúcida	Incolor (MC)	Brilhante	Sem hemólise
Salmonella spp.	Pequeno /Fétido	Circular	Convexa	Translúcida	Centro preto(SS) Incolor(MC)	Brilhante	Sem hemólise
Serratia spp.	Médio /Fermento de pão	Circular	Convexa	Opaca	Cinza(AS) Clara(MC)	Levemente mucóide	Sem hemólise
Providencia spp.	Médio /Fétido	Ondulada	Achatada	Translúcida	Incolor (MC)	Brilhante	Sem hemólise
Proteus spp.	Médio /Fétido	Ondulada	Achatada	Translúcida	Incolor (MC)	Brilhante	Sem hemólise
Pseudomonas aeruginosa	Médio /Uva	Irregular	Achatada	Transparente	Incolor (MC). Pigmento esverdeado.	Brilhante	Com ou sem.
Candida spp.	Médio /Pão	Circular, filamentosa	Elevada	Opaca	Branca	Cremosa	Sem

AS= Agar sangue; MC=Agar MacConkey; SS= Agar Salmonella-Shigella;

Tamanho das colônias (mm) : Grande = maior que 1 mm de diâmetro (Ex: Klebsiella pneumoniae)

                                    Média = 1 mm de diâmetro (Ex: Enterococcus faecalis)

                                    Pequena = menor que 1 mm de diâmentro (Ex: Streptococcus pyogenes)
Fonte: Oplustil et al., 2010 (com modificações feitas pela autora)

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B. Segundo passo: Realizar o GRAM da colônia.

1. Confeccionar o esfregaço, fixar o esfregaço na chama do bico de Bunsen;

2. Dispor as lâminas em um suporte não muito próximo uma de outra;

3. Cobrir o esfregaço com papel de filtro;

4. Cobrir o papel de filtro com cristal violeta e deixar por 1 minuto;

5. Lavar com água corrente, retirando o papel de filtro e o excesso do corante;

6. Cobrir o esfregaço com Lugol fraco por 1 minuto;

7. Lavar com água corrente;

8. Descorar com álcool-acetona, primeiro cobrindo o esfregaço deitado no suporte durante 10-20 segundos, e depois gotejando a lâmina inclinada até que não escorra mais o cristal violeta (cuidado para não descorar demais). PS: Pode se utilizar apenas álcool a 95% ou acetona;

9. Lavar com água corrente;

10. Cobrir com fucsina ou safranina por 30 segundos diluidas 1/10 (se o corante foi novo deixar um tempo ainda menor)

11. Lavar com água corrente e secar ao ar ou com papel de filtro;

12. Examinar ao microscópio.

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C. Terceiro passo: Após determinar afinidade pelo GRAM e arranjo bacteriano, seguir com os testes para cada grupo: cocos Gram-positivos, bastonetes Gram-negativos. cocobacilos Gram-negativos, bastonetes Gram-positivos. 
-Caso esteja diante de Candida spp., fazer o teste do tubo germinativo; ou semear em meio cromogênico para identificação das espécies Candida albicans, Candida tropicalis e Candida krusei. 

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                                       MORFOLOGIA DE COLÔNIAS BACTERIANAS

Referências bibliográficas:

- Oplustil, C.P.; Zoccoli, C.M.; Tobouti, N.R.; Sinto, S.I. Procedimentos Básicos em Microbiologia Clínica, 3ª Ed. Sarvier, São Paulo, SP, 2010.

- Conhecimento adquirido

Fonte: Lima, 2018. (Arquivo pessoal da autora) 

Fonte: Lima, 2018. (Arquivo pessoal da autora) 

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