3. FUNGOS FILAMENTOSOS

Fonte: http://reinofungi1.blogspot.com.br

MICOLOGIA (Parte 2 – Prática de Fungos Filamentosos)

(Microbiologia Básica / Profa . ZilkaNanes Lima)
Copyright  ZILKA NANES LIMA © 2016

A.    ISOLAMENTO DE FUNGOS DO AR

1.  Finalidade: O isolamento de fungos anemófilos é importante na determinação da microbiota do ar de uma área, nos estudos sobre alergia a fungos, na determinação do grau de contaminação de ambientes, para obtenção de amostras de interesse industrial, etc.
2. Fundamento: Usando-se a técnica de exposição de placas com meio de cultura durante tempos pré-fixados, os esporos em flutuação no ar sedimentam sobre o meio e ai germinam.
3. Material: a. Placa com ágar Sabouraud ou ágar batata dextrose.

                            b. Lactofenol azul algodão

                            c. Lâminas, lamínulas, alças, etc.

                            d. Tubos com ágar-Sabouraud ou ágar batata inclinado.     

       4. Execução da técnica:

                      a. Abrir a placa e expor durante 20 minutos

                      b. Fechar, identificar e incubar à temperatura ambiente com a tampa pra cima

                      c. Acompanhar o desenvolvimento das culturas

                                   (deixar 15 dias incubado à temperatura ambiente)

                      d. Analisar a macromorfologia das colônias fúngicas

                      e. Repicar em tubos para isolamento e posterior realização de microcultivo

         5. Resultados

B. TÉCNICAS PARA IDENTIFICAÇÃO DE FUNGOS FILAMENTOSOS

B.1- Técnica de esgarçamento:

            Utilizada como primeira tentativa (mais rápida) para identificação de colônias filamentosas. As estruturas fúngicas são quebradas, tornando-se mais difícil a identificação.

· Com alça de platina em “L”, retirar um pedaço da colônia de bolor crescida no ágar.

· Colocar 1 a 2 gotas de Lactofenol azul-algodão. Cobrir com lamínula, comprimindo levemente. Observar em microscópio com aumento de 400X.

B.2 - Microcultivo em lâmina:

            No microcultivo em lâmina, as estruturas permanecem íntegras além de ser utilizado um meio de cultura (ágar batata), que estimula a produção de macro e microconídeos, que na maioria das vezes identificam o fungo. Estimula, também, a formação de pigmento.

            Esterilizar placas de Petri com 3 lâminas no interior (duas servem para suporte e a outra para realizar o microcultivo).

· Preparar ágar batata em placa

· Cortar em quadradinhos

· Colocar um pedaço de ágar batata no centro da lâmina do microcultivo

· Com a alça em “L”, cortar pedaços bem pequenos da colônia do bolor, crescidos no ágar e colocar nos quatro lados do pedaço de ágar batata

· Cobrir com lamínula estéril, pressionando levemente

. Colocar um pouco de água destilada estéril e deixar á 25^O C, repondo a água estéril, sempre que necessário. Deixar por 10-15 dias, dependendo da velocidade do crescimento do fungo.

· Para montar, retirar a lamínula com pinça estéril. Fixar o fungo na lamínula colocando 1 a 2 gotas de álcool e esperar secar. Montar essa lamínula em lâmina limpa, com uma gota de lactofenol azul-algodão.

. A lamínula pode ser vedada com esmalte de unha ou Entellan para conservar por mais tempo.

   Professora Zilka Nanes Lima (Microbiologia e Imunologia Clínica)

    MICROBIOLOGIA BÁSICA

Fonte: Apostila de Micologia Clínica (Professor Sandro Rogério de Almeida – Faculdade de Ciências Farmacêuticas da Universidade de São Paulo)

Anverso de colônia de fungo filamentoso.
Fonte: Lima, 2018. (Arquivo pessoal da autora) 

Reverso de colônia de fungo filamentoso.
Fonte: Lima, 2018. (Arquivo pessoal da autora) 

                           

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