18. INTERPRETANDO O ANTIBIOGRAMA

Antibiograma da enterobactéria Salmonella spp.
Fonte: Autora (Arquivo pessoal)

CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E DA SAÚDE

DEPARTAMENTO DE FARMÁCIA

ATIVIDADE PRÁTICA (UNIDADE TEMÁTICA II

                                     (Microbiologia Básica / Profa . Zilka Nanes Lima)
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Aluno:    _____________________________________________________________­­­­________

Curso: Farmácia      Data : __________________________  Matrícula: ___________________

Assunto: ANTIBIOGRAMA (Método Kirby-Bauer)

PRIMEIRO DIA:

- Preparar o antibiograma (seguir apostila sobre ANTIBIOGRAMA)

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- Preparar uma suspensão bacteriana-padrão equivalente a 0,5 da escala de McFarland que corresponde a aproximadamente 1 x 10⁸ UFC/mL e que pode ser obtido pelo método da suspensão direta ou método de crescimento. Essa etapa é crítica e deve ser seguida conforme as recomendações para a obtenção de resultados confiáveis.

- No método da suspensão direta com o auxílio de alça ou agulha bacteriológica tocar na superfície de três a quatro colônias com a mesma morfologia e suspender em 3 a 4 mL de solução fisiológica estéril, caldo Mueller Hinton ou caldo TSB.

(Preparo do inóculo) - Comparar o inóculo ajustado com a escala de MacFarland colocando os tubos lado a lado contra um cartão de fundo preto com tiras brancas. Os tubos devem ter a mesma dimensão/diâmetro, para serem comparados.

- Se a turbidez ultrapassar a escala ajustar com solução fisiológica estéril.

(Inoculação nas placas) - Dentro de 15 minutos após o ajuste do inoculo, proceder à semeadura introduzindo um swab estéril na suspensão padronizada.

- Comprimir o swab na parede interna do tubo para retirar o excesso do inoculo e semear na superfície do ágar Mueller Hinton em três direções.

- Deixar a placa semeada tampada por 5 minutos e não mais de 15 minutos à temperatura ambiente, para que o inóculo seja completamente absorvido pelo ágar antes de aplicar os discos.

(Aplicação dos discos) - A distância entre um disco e outro dever ser no mínimo de 24 mm. Colocar no máximo 12   discos em placas de 150 mm e não mais que 5 em placas de 90 mm.

- Após a colocação dos discos, pressionar levemente a superfície de cada disco com o auxílio de uma pinça.

- Uma vez o disco colocado, não remover do lugar, pois a difusão da droga é imediata.

(Incubação das placas) - Incubar as placas invertidas em, no máximo, 15 minutos após a colocação dos discos.

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- Incubar em ar ambiente. A temperatura máxima da estufa dever estar aferida em 35 ± 1^oC, e de 33-35^oC para testes com disco de oxacilina e cefoxitina para Staphylococcus spp.

- O tempo de incubação deve ser de 18±2 horas. (Exceções: vide Oplustil et. al.; BrCAST 2016, CLSI M100-S25)

SEGUNDO DIA:  - A interpretação dos resultados é feita medindo-se os halos de inibição do crescimento bacteriano nas placas semeadas na aula passada, ao redor dos discos. A medida é realizada com paquímetro, régua escolar transparente e anotada em milímetro (mm).

- Os halos de inibição para cada antimicrobiano testado devem ser interpretados nas categorias sensível, intermediário ou resistente, de acordo com critérios estabelecidos nas tabelas do BrCAST (EUCAST), em português disponível em: www.brcast.org.br - “The Brazilian Commitee on Antimicrobial Susceptibility Testing”  e CLSI M100-S28 (Clinical Laboratory Standards Institute).

ANTIBIOGRAMA (Método Kirby-Bauer)

Micro-organismo testado: ______________________________________________

Antibiótico	Código	Conc. (µg)		Ponto  de corte Diamêtro do halo (mm) S ≥                Int.              R <			Tamanho do halo	Interpretação
Gentamicina	GEN	10	17		14-16	14
Cefoxitina	CFO	30	-		-	-	------------------	Somente interpretação para CIM no BrCAST.
Aztreonam	ATM	30	24		-	21
Cloranfenicol	CLO	30	17		-	17
Ceftriaxona	CRO	30	23		20-22	20
Tetraciclina	TET	30	-		-	-	-----------------	Não aplicável segundo BrCAST.

- Padrões interpretativos segundo documento do BrCAST para Enterobacteriaceae

- Tamanho do halo deve ser anotado em milímetros (mm).

- Interpretação: S= sensível / Int.=resistência intermediária / R=resistente

Micro-organismo testado: ______________________________________________

Antibiótico	Código	Conc. (µg)	Sensível	Intermediário	Resistente	Tamanho do halo	Interpretação
Gentamicina	GEN	10	≥ 15	13-14	≤ 12
Cefoxitina	CFO	30	≥ 18	15-17	≤ 14
Aztreonam	ATM	30	≥ 21	18-20	≤ 17
Cloranfenicol	CLO	30	≥ 18	13-17	≤ 12
Ceftriaxona	CRO	30	≥ 23	20-22	≤ 19
Tetraciclina	TET	30	≥ 15	12-14	≤ 11

- Padrões interpretativos segundo documento do CLSI M100-S27 para Enterobacteriaceae

- Tamanho do halo deve ser anotado em milímetro (mm).

- Interpretação: S= sensível / RI=resistência intermediária / R=resistente

Referências:

1. Oplustil, C.P.; Zoccoli, C.M.; Tobouti, N.R.; Sinto, S.I. Procedimentos Básicos em Microbiologia Clínica, 3ª Edição. Ed. Sarvier, São Paulo, SP, 2010.

2. BrCAST 2018 - http://brcast.org.br/documentos/

3. CLSI 2018 (M-100 S-27) - http://www.facm.ucl.ac.be/intranet/CLSI/CLSI-2017-M100-S27.pdf

4. Levinson, W. Microbiologia Médica e Imunologia. 13^a Edição. Ed. ArtMed. Porto Alegre – RS, 2016.

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Professora Zilka Nanes Lima (Microbiologia Básica)